| 貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 價(jià)格 | | D1850-50 | 全血基因組DNA提取試劑系統(tǒng) | 50ml | 360.00 | | D1850-200 | 全血基因組DNA提取試劑系統(tǒng) | 200ml | 960.00 |
全血基因組DNA提取試劑系統(tǒng)使用說明書
使用前請(qǐng)根據(jù)使用量準(zhǔn)備一些新的容器，將10×紅細(xì)胞裂解液用雙蒸水稀釋成1×的即用型紅細(xì)胞裂解液（可一次性稀釋完，也可以分次稀釋，一般稀釋后的紅細(xì)胞裂解液可保存半年以上）。
使用說明:
自備試劑：異丙醇，75%乙醇
處理血液量 1ml 5ml 10ml
紅細(xì)胞裂解液(1×) 5ml 25ml 50ml
白細(xì)胞裂解液 0.5ml 2.5ml 5ml
蛋白沉淀液 1ml 2.5ml 5ml
異丙醇 1ml 5ml 10ml
75%乙醇 1ml 5ml 10ml
DNA溶解液 100ul 0.5ml 1ml
1、 樣品的處理(本產(chǎn)品適用于處理新鮮的或已經(jīng)添加抗凝劑的血液樣品)：在血液樣品中加入3倍體積的紅細(xì)胞裂解液(請(qǐng)確認(rèn)已經(jīng)稀釋過)，充分顛倒混勻，12000rpm離心1min(如為大量提取并且為大離心機(jī)，可11000轉(zhuǎn)離心5min)，小心吸去上清，再加入2倍體積的紅細(xì)胞裂解液，用移液器輕輕吹打沉淀，充分混勻，離心，棄上清，沉淀為白細(xì)胞。向沉淀中加500ul（以1ml全血為例）白細(xì)胞裂解液，振蕩*混勻(或者用移液器吹打)。
2、65℃水浴10-20min，期間可顛倒離心管混勻數(shù)次，直看不見明顯細(xì)胞為止。
3、加入1倍體積蛋白沉淀液(以1ml全血為例，加入500ul)，充分顛倒混勻，此時(shí)會(huì)出現(xiàn)白色沉淀，65℃水浴5min，12000rpm離心5min(或者11000轉(zhuǎn)離心10min)，小心吸取上清(沉淀可能在上層，吸取下清)，放入一干凈離心管中，如還有沉淀，可再次離心。
4、在上清中加入1倍體積（以1ml全血為例，加入1ml）的異丙醇，混勻。12000rpm離心5min(或者11000轉(zhuǎn)離心10min)，此時(shí)可看到管低有少量白色沉淀。小心吸取上清，棄掉。
5、向離心管中加入75%乙醇，12000rpm離心1min(或者11000轉(zhuǎn)離心2min)，輕輕棄去上清液，再次離心，用移液器吸取上清，請(qǐng)不要接觸沉淀。
6、將離心管敞口置于室溫或50℃溫箱放置數(shù)分鐘，目的是將離心管中殘余的乙醇去除，否則乙醇會(huì)影響后續(xù)的實(shí)驗(yàn)如酶切、PCR等。
7、向離心管中加入100-300ul經(jīng)65℃水浴預(yù)熱的DNA溶解液，室溫放置讓DNA自然溶解。如果DNA難于溶解，可室溫放置。
8、DNA電泳檢測。
注意事項(xiàng):
1. 樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融，否則會(huì)導(dǎo)致提取的DNA段較小且提取量也下降。
2. 若試劑盒中的溶液出現(xiàn)沉淀，可在65℃水浴中重新溶解后再使用，不影響提取效果。
3. DNA濃度及純度檢測：得到的基因組DNA段的大小與樣品保存時(shí)間、操作過程中的剪切力等因素有關(guān)。回收得到的DNA段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)檢測濃度與純度。DNA應(yīng)在OD260處有顯著吸收峰， OD260值為1相當(dāng)于大約 50 μg/ml雙鏈DNA、40 μg/ml單鏈DNA。OD260/OD280比值應(yīng)為1.7-1.9，如果洗脫時(shí)不使用洗脫緩沖液，而使用去離子水，比值會(huì)偏低，因?yàn)閜H值和離子存在會(huì)影響光吸收值，但并不表示純度低。
相關(guān)產(chǎn)品：
D1800 全血基因組DNA提取試劑盒
E1020 EB染色液
D1010 6×DNA Loading Buffer
T1060 50×TAE 緩沖液
T1050 5×TBE 緩沖液
M1060 D2000 DNA Ladder
M1400 1kb DNA Ladder
G8142 GoldView II型核酸染色劑(5000×) |
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