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T1320 胰蛋白酶-EDTA消化液

在組織細胞的體外培養(yǎng)和原代細胞培養(yǎng)中的組織細胞分散（將組織塊制備成單個細胞懸液）和傳代細胞培養(yǎng)中，貼壁生長細胞的消化分散均要使用組織細胞消化液。常用的消化液為胰蛋白酶，EDTA，其功能主要是使細胞間的蛋白質(zhì)水解，使組織或細胞分散成單個細胞，制成細胞懸液用于進一步的實驗。
胰蛋白酶（Trypsin）簡稱胰酶，是由動物豬胰臟中提取的一種蛋白酶制劑。胰蛋白酶作用于與賴氨酸或精氨酸相連接的肽健，除去細胞間粘蛋白及糖蛋白，影響細胞骨架，打開細胞-細胞，細胞-基質(zhì)之間的連接從而使細胞從培養(yǎng)板上脫落下來并使細胞分散成單個細胞。胰蛋白酶液濃度越高，作用越強，但超過一定限度會損傷細胞。細胞消化用胰蛋白酶常用的工作濃度為0.25％，pH為7.2-7.4之間，用濾器過濾除菌。EDTA用來螯合游離的鎂離子和鈣離子，以便保持抑制胰蛋白酶的活性。注意EDTA不能被血清中和，使用后培養(yǎng)瓶要*清洗，否則再培養(yǎng)時細胞容易脫壁。
胰蛋白酶液消化時間：2-10分鐘。用含血清培養(yǎng)液終止其對細胞的消化作用。
使用說明：1、貼壁細胞的消化：貼壁細胞在培養(yǎng)瓶中長成致密單層后，繼續(xù)生長的空間不足，培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成份也消耗較多，同時代謝廢物也有較多堆積，需要分瓶培養(yǎng)，擴增、傳代。對于懸浮生長細胞和貼壁不太緊的細胞如SP2/0，293等，可直接吹散后分瓶；而對于貼壁較緊的細胞如Hela，HepG2，CHO等，則需要以細胞消化液消化后，才能脫落和分散，擴瓶。一般操作過程為（以下操作均必須嚴格按無菌操作的要求進行）：
   （1）將長成致密單層細胞的細胞瓶中原來的培養(yǎng)液棄去； 
   （2）加入0.25％胰酶溶液，視細胞瓶的大小加入體積為0.5ml或更多（依培養(yǎng)器皿的大小而定），以使充分浸潤； 
   （3）一般消化時間約為13分鐘，肉眼觀察瓶底由半透明（細胞單層連接成片）轉(zhuǎn)為點狀透明（出現(xiàn)細小空隙）時，棄去細胞消化液，并加入適量的*培養(yǎng)液終止消化，吹打分散；  
   （4）視實驗目的分入多瓶繼續(xù)培養(yǎng)，一般比例為一傳二到一傳四的。 
2、組織的消化：不同的組織需要消化的時間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。

注意事項：1．由于組織或細胞性質(zhì)不同，實驗人員應依據(jù)具體情況，確定佳消化時間；消化細胞時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁和生長狀況；
2、分裝胰蛋白酶-EDTA消化液的過程中要特別注意避免消化液被細菌污染；
3、胰蛋白酶-EDTA消化液建議-20℃保存，切忌反復凍融，
4、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套進行試驗操作。

相關(guān)文獻：

《Dexmedetomidine attenuates the neurotoxicity of propofol toward primary hippocampal neurons in vitro via Erk1/2/CREB/BDNF signaling pathways》 作者:Youbing Tu,Yubing Liang,Yong Xiao,Jing Lv,Ruicong Guan,Fei Xiao,Yubo Xie,and Qiang Xiao 期刊:Drug Design, Development and Therapy 影響因子:3.486 PMID:30858699

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T1320 胰蛋白酶-EDTA消化液