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產(chǎn)品名稱:琥珀酸脫氫酶(SDH)活性檢測試劑盒

產(chǎn)品型號:BC0955

產(chǎn)品報(bào)價(jià):

產(chǎn)品特點(diǎn):琥珀酸脫氫酶(SDH)活性檢測試劑盒
測定意義:SDH(EC 1.3.5.1)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中。SDH是線粒體的一種標(biāo)志酶,位于線粒體內(nèi)膜上的一種膜結(jié)合酶,是連接呼吸電子傳遞和氧化磷酸化的樞紐之一。此外,為多種原核細(xì)胞產(chǎn)能的呼吸鏈提供電子。
測定原理:SDH催化琥珀酸脫氫生成延胡索酸,脫下的氫通過吩嗪二甲酯硫酸(PMS)傳遞還原2,6-二氯酚靛酚(DCPIP),并且

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BC0955琥珀酸脫氫酶(SDH)活性檢測試劑盒的詳細(xì)資料:

琥珀酸脫氫酶(SDH)活性檢測試劑盒

操作步驟:

一、樣本的前處理:組織、細(xì)菌或細(xì)胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離:

1、 稱取約0.1g 組織或收集500 萬細(xì)菌或細(xì)胞,加入1mL 試劑一和10uL 試劑三,用冰浴勻漿器或研缽勻漿。

2、 將勻漿600g,4℃離心5min。

3、 棄沉淀,將上清液移另一離心管中,11000g,4℃離心10min。

4、 上清液即胞漿提取物,可用于測定從線粒體泄漏的SDH(此步可選做)。

5、 在步驟④的沉淀中加入200uL 試劑二和2uL 試劑三,超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3 秒,間隔10 秒,重復(fù)30 次),用于線粒體SDH 活性測定。

二、測定步驟和加樣表

1、 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min 以上,調(diào)節(jié)波長600nm,蒸餾水調(diào)零。

2、 樣本測定(1)在試劑四中加入18mL 蒸餾水充分溶解,置于37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)水浴10min; 用不完的試劑4℃保存一周;(2)在試劑五中加入1mL 蒸餾水,充分溶解待用;用不完的試劑4℃保存一周;(3)在微量石英比色皿或96 孔板中加入10μL 樣本、10μL 試劑五和180μL 試劑四,混勻,立即記錄600nm 處20s 時(shí)的吸光值A(chǔ)1 和 1min20s 后的吸光值A(chǔ)2,計(jì)算ΔA=A1-A2。

琥珀酸脫氫酶(SDH)活性檢測試劑盒

a. 用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下

(1) 按樣本蛋白濃度計(jì)算單位的定義:每mg 組織蛋白每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個(gè)酶活性單位。 SDH 活性(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×10 9]÷(Cpr×V 樣) ÷T=952×ΔA÷Cpr

(2) 按樣本鮮重計(jì)算單位的定義:每g 組織每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個(gè)酶活性單位。 SDH 活性(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×10 9]÷(W× V 樣÷V 樣總) ÷T=192×ΔA÷W

(3) 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算單位的定義:每1 萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個(gè)酶活性單位。 SDH 活性(nmol/min/10 4 cell)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×10 9]÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T=0.385×ΔA V 反總:反應(yīng)體系總體積,2×10 -4 L;ε:2,6-二氯吲哚酚摩爾消光系數(shù),2.1×10 4 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V 樣:加入樣本體積,0.01 mL;V 樣總:加入提取液體積,0.202 mL;T:反應(yīng)時(shí)間,1 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500 萬。

b. 用96 孔板測定的計(jì)算公式如下

(1) 按樣本蛋白濃度計(jì)算單位的定義:每mg 組織蛋白每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個(gè)酶活性單位。 SDH 活性(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×10 9]÷(V 樣×Cpr) ÷T=1904×ΔA÷Cpr

(2) 按樣本鮮重計(jì)算單位的定義:每g 組織每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個(gè)酶活性單位。 SDH 活性(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×10 9]÷(W× V 樣÷V 樣總)÷T=384×ΔA÷W

(3) 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算單位的定義:每1 萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個(gè)酶活性單位。 SDH 活性(nmol/min/10 4 cell)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×10 9]÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T=0.77×ΔA V 反總:反應(yīng)體系總體積,2×10 -4 L;ε:2,6-二氯吲哚酚摩爾消光系數(shù),2.1×10 4 L / mol /cm;d: 96 孔板光徑,0.5cm;V 樣:加入樣本體積,0.01 mL;V 樣總:加入提取液體積,0.202mL;T:反應(yīng)時(shí)間,1 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500 萬。

 

試劑一:100mL×1 瓶,-20℃保存;試劑二:20mL×1 瓶,-20℃保存;試劑三:1.5mL×1 支,-20℃保存;試劑四:粉劑×1 瓶,4℃保存;試劑五:粉劑×1 支,-20℃保存;

相關(guān)文獻(xiàn): 

《Cell death induced by α-terthienyl via reactive oxygen species-mediated mitochondrial dysfunction and oxidative stress in the midgut of Aedes aegypti larvae》 作者:JieZhangaShakilAhmadaLan-YingWangaQianHanbJian-ChunZhangaYan-PingLuo 期刊:Free Radical Biology and Medicine 影響因子:5.657 PMID:31022448

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