產品名稱:線粒體呼吸鏈復合體Ⅲ活性檢測試劑盒
產品型號:BC3240
產品特點:線粒體呼吸鏈復合體Ⅲ活性檢測試劑盒測定意義:線粒體復合體Ⅲ(EC 1.10.2.2)又稱CoQ-細胞色素C 還原酶,廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞的線粒體中,是線粒體呼吸電子傳遞鏈主路和支路的共有成分,負責把還原型CoQ 的氫傳遞給細胞色素C,生成還原型細胞色素C。測定原理:與氧化型細胞色素C 不同,還原型細胞色素C 在550nm 有特征光吸收,因此550nm 光吸收增加速率能夠反
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線粒體呼吸鏈復合體Ⅲ活性檢測試劑盒
線粒體呼吸鏈復合體Ⅲ活性檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
注意:正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定
貨號:BC3240
規(guī)格:25T/12S
產品內容:
提取液:液體 20mL×1 瓶,4℃保存;
試劑一:液體 20mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:粉劑×1 支,-20℃保存;
試劑三:液體 3mL×1 瓶,4℃保存;
產品說明:
線粒體復合體Ⅲ(EC 1.10.2.2)又稱 CoQ-細胞色素 C 還原酶,廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞的線粒體中,是線粒體呼吸電子傳遞鏈主路和支路的共有成分,負責把還原型 CoQ 的氫傳遞給細胞色素 C,生成還原型細胞色素 C。與氧化型細胞色素 C 不同,還原型細胞色素 C 在 550nm 有特征光吸收,因此 550nm 光吸收增加速率能夠反映線粒體復合體Ⅲ酶活性。
試驗中所需的儀器和試劑:
可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
操作步驟:
一、復合體Ⅲ的提?。?br />① 稱取約0.1g組織或收集500萬細胞,加入1.0 mL提取液,用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
② 4 ℃ 600 g離心10min。
③ 將上清液移另一離心管中,4 ℃ 11000 g離心15min。
④ 上清液即胞漿提取物,可用于測定從線粒體泄漏的復合體Ⅲ(此步可選做,可以判斷線粒體提取效果)。
⑤ 在沉淀中加入200uL提取液,超聲波破碎(功率20%,超聲5秒,間隔10秒,重復15次),用于復合體Ⅲ酶活性測定,并且用于蛋白含量測定。
二、測定步驟:
1. 可見分光光度計預熱30min 以上,調節(jié)波長550nm,蒸餾水調零。
2. 工作液的配制:臨用前把試劑二轉移到試劑一中混合溶解,用不完的試劑4℃可保存一周;
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