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產(chǎn)品名稱:ADPG焦磷酸化酶(AGP)活性檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品型號(hào):BC0430

產(chǎn)品報(bào)價(jià):

產(chǎn)品特點(diǎn):ADPG焦磷酸化酶(AGP)活性檢測(cè)試劑盒
測(cè)定意義:AGP催化葡萄糖-1-磷酸與ATP反應(yīng)生成淀粉合成的直接前體ADPG,是植物淀粉生物合成的主要限速步驟。
測(cè)定原理:AGP催化的逆向反應(yīng)生成G1P,在反應(yīng)體系中添加的磷酸己糖變位酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶依次催化生成6-磷酸葡萄糖酸和NADPH,340nm下測(cè)定NADPH增加速率,即可計(jì)算AGP活性。

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BC0430ADPG焦磷酸化酶(AGP)活性檢測(cè)試劑盒的詳細(xì)資料:

ADPG焦磷酸化酶(AGP)活性檢測(cè)試劑盒

操作步驟:

1,分光光度計(jì)預(yù)熱 30min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 340nm,蒸餾水調(diào)零。并將試劑一置 30℃保溫 10min 以上。

2,在離心管中按順序加入以下試劑:測(cè)定管試劑一(μL) 100 試劑二(μL) 10 試劑三(μL) 50 試劑四(μL) 100 樣本(μL) 20 混勻,30℃保溫 15 min,置沸水浴中 1 min,冰浴迅速冷卻試劑一(μL) 300 試劑五(μL) 100 試劑六(μL) 10 試劑七(μL) 10 混勻后立即在 340 nm 波長(zhǎng)下記錄初始吸光度 A1 和 2min 后的吸光度 A2,計(jì)算ΔA=A2-A1。

ADPG焦磷酸化酶(AGP)活性檢測(cè)試劑盒

AGP 活性計(jì)算:

1、按樣本蛋白濃度計(jì)算:?jiǎn)挝坏亩x:每 mg 組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol NADPH 定義為一個(gè)酶活性單位。 AGP(U/mg prot)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×10 9] ÷(V 樣×Cpr)÷T=2813×ΔA÷Cpr。此法需要自行測(cè)定粗酶液蛋白質(zhì)濃度。

2、按照樣本鮮重計(jì)算單位的定義:每 g 組織在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol NADPH 定義為一個(gè)酶活力單位。 AGP 活性(U/g mass)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×10 9] ÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T=2813×ΔA÷W

V 反總:反應(yīng)體系總體積,7×10 -4 L;ε:NADPH 摩爾消光系數(shù),6.22×10 3mol/L/cm;V 樣:加入樣本體積,0.02 mL;

V 樣總:加入提取液體積,1 mL;d:比色皿光徑 1cm。Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL。W:樣品質(zhì)量,g。T:反應(yīng)時(shí)間 2min。

ADPG焦磷酸化酶(AGP)活性檢測(cè)試劑盒

提取液:液體 30mL×1 瓶,4℃保存; 試劑一:液體 10mL×1 瓶,4℃保存;試劑二:粉劑×1 支,4℃保存;臨用前每支加入 250μL 雙蒸水充分溶解備用;用不完的試劑仍 4℃保存;試劑三:粉劑×1 瓶,4℃保存;臨用前加入 2mL 雙蒸水充分溶解備用;用不完的試劑仍 4℃保存;試劑四:粉劑×1 瓶,4℃保存;臨用每瓶前加入 3mL 雙蒸水充分溶解備用;用不完的試劑仍 4℃保存;試劑五:粉劑×1 瓶,-20℃保存;臨用前每瓶加入 3mL 雙蒸水充分溶解備用;用不完的試劑仍-20℃保存;試劑六:粉劑×1 支,-20℃保存;臨用前每支加入 250μL 雙蒸水充分溶解備用;用不完的試劑 4℃保存;試劑七:粉劑×1 支,-20℃保存;臨用前每支加入 250μL 雙蒸水充分溶解備用;用不完的試劑 4℃保存;

 

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