產(chǎn)品名稱:酵母基因組DNA大量提取試劑盒
產(chǎn)品型號:D1910
產(chǎn)品特點(diǎn):酵母基因組DNA大量提取試劑盒本試劑盒采用可以特異性結(jié)合 DNA 的離心吸附柱和*的緩沖液系統(tǒng),提取酵母基因組 DNA。離心吸附柱中 采用的硅基質(zhì)材料為本公司*新型材料,能夠高效專一吸附 DNA,可大限度去除雜質(zhì)蛋白及細(xì)胞中其他有機(jī) 化合物。
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酵母基因組DNA大量提取試劑盒
產(chǎn)品簡介:
本試劑盒采用可以特異性結(jié)合 DNA 的離心吸附柱和*的緩沖液系統(tǒng),提取酵母基因組 DNA。離心吸附柱中 采用的硅基質(zhì)材料為本公司*新型材料,能夠高效專一吸附 DNA,可大限度去除雜質(zhì)蛋白及細(xì)胞中其他有機(jī) 化合物。提取的基因組 DNA 片段大,純度高,質(zhì)量穩(wěn)定可靠。使用本試劑盒提取的基因組 DNA 可用于各種常規(guī) 操作,包括酶切、 PCR、文庫構(gòu)建、Southern 雜交等實(shí)驗(yàn)。
操作步驟:
使用前請先在漂洗液中加入無水乙醇,加入體積請參照瓶體上的標(biāo)簽。所有離心步驟均為使用臺式離心機(jī)在 室溫下離心。
1、在離心管中收集酵母細(xì)胞 20-40ml(不超過 109 ce l1 s),10000rpm 離心 1min,盡量吸除上清。
2、酵母細(xì)胞壁的破除:向酵母菌體中加入 9ml 山梨醇 Buffer。充分懸浮菌體,加入 600ul 酵母破壁酶和 100ul 巰 基還原劑,充分混勻。30℃處理 1-2h,期間可顛倒離心管混勻數(shù)次。
3、10000rpm 離心 lmin,棄上清,收集沉淀。
4、向沉淀中加入 5ml 溶液 A,充分懸浮沉淀,向懸浮液中加入 500ul 的 RNase A(10mg/ml),充分顛倒混勻,室溫 放置 10min。
5、加入 500ul 的蛋白酶 K(10mg/ml),充分顛倒混勻。65℃水浴消化 30-60min,消化期間可顛倒離心管混勻數(shù)次, 直樣品消化*為止。
6、加入 5ml 溶液 B,再加入 5ml 無水乙醇,充分顛倒混勻,此時可能會出現(xiàn)絮狀沉淀,不影響 DNA 的提取,可將溶液和絮狀沉淀都加入吸附柱中,室溫放置 2min。
7、10000rpm 離心 2min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。
8、向吸附柱中加入 7ml 漂洗液(使用前請先檢查是否己加入無水乙醇)。10000rpm 離心 1min,棄廢液,將吸附柱 放入收集管中。
9、向吸附柱中加入 7ml 漂洗液, 10000rpm 離心 l min, 棄廢液,將吸附柱放入收集管中。
10、10000rpm 離心 2min,將吸附柱敞口置于室溫或 50℃溫箱放置數(shù)分鐘,目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除, 否則漂洗液中的乙醇會影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)如酶切、PCR 等。
11、將吸附柱放入一個干凈的離心管中,向吸附膜中央懸空滴加 1-2ml 經(jīng) 65℃水浴預(yù)熱的洗脫液,室溫放置 5min, 10000rpm 離心 l min。
12、離心所得洗脫液再加入吸附柱中,10000rpm 離心 2 min,即可得到高質(zhì)量的基因組 DNA。
注意事項(xiàng):
1、樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融,否則會導(dǎo)致提取的 DNA 片段較小且提取量下降。
2、若試劑盒中的溶液出現(xiàn)沉淀,可在 65℃水浴中重新溶解后再使用,不影響提取效果。
3、如果實(shí)驗(yàn)中的離心步驟出現(xiàn)柱子堵塞的情況,可適當(dāng)延長離心時間。
4、洗脫緩沖液的體積不少于 1ml,體積過小會影響回收效率;洗脫液的 pH 值對洗脫效率也有影響,若需要 用水做洗脫液應(yīng)保證其 pH 值在 8.0 左右(可用 NaOH 將水的 pH 值調(diào)此范圍), pH 值低于 7. 0 會降低洗脫效率。 DNA 產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃,以防 DNA 降解。
5、 DNA 濃度及純度檢測:得到的基因組 DNA 片段的大小與樣品保存時間、操作過程中的剪切力等因素有關(guān)。 回 收得到的 DNA 片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)檢測濃度與純度。DNA 應(yīng)在 OD260處有顯著吸收峰,OD260 值為 1.0 相當(dāng)于大約 50μg/ml 雙鏈 DNA、40μg/ml 單鏈 DNA。OD260/0D280比值應(yīng)為 1.7-1.9,如果洗脫時不使用洗 脫緩沖液,而使用去離子水,比值會偏低,因?yàn)?pH 值和離子存在會影響光吸收值,但并不表示純度低。
相關(guān)產(chǎn)品:
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G8142 GoldView II 型核酸染色劑(5000×)
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相關(guān)文獻(xiàn):
《A rapid and efficient one-step site-directed deletion, insertion, and substitution mutagenesis protocol》 作者:Deguang Wu,Xuewu Guo,Jun Lu,Xi Sun,F(xiàn)eng Li,Yefu Chen,Dongguang Xiao 期刊:Analytical Biochemistry 影響因子:2.275 PMID:23256925
《Enhanced freeze tolerance of baker’s yeast by overexpressed trehalose-6-phosphate synthase gene (TPS1) and deleted trehalase genes in frozen dough》 作者:Haigang Tan,Jian Dong,Guanglu Wang,Haiyan Xu,Cuiying Zhang,Dongguang Xiao 期刊:Journal of Industrial Microbiology & Biotechnology 影響因子:2.533 PMID:24951963
《A two-step integration method for seamless gene deletion in baker’s yeast》 作者:Jian Dong,Guanglu Wang,Cuiying Zhang,Haigang Tan,Xi Sun,Mingyue Wu,Dongguang Xiao 期刊:Analytical Biochemistry 影響因子:2.275 PMID:23597844
酵母基因組DNA大量提取試劑盒
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