產(chǎn)品名稱:solarbio-全血基因組DNA提取試劑盒
產(chǎn)品型號:D1800-50
產(chǎn)品特點(diǎn):本試劑盒提取的基因組DNA可用于各種常規(guī)操作,包括酶切、 PCR、文庫構(gòu)建、Southern雜交等實(shí)驗(yàn)。
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貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 價(jià)格 |
D1800-50 | 全血基因組DNA提取試劑盒 | 50T | 400.00 |
D1800-100 | 全血基因組DNA提取試劑盒 | 100T | 700.00 |
全血基因組DNA提取試劑盒說明書
本試劑盒采用可以特異性結(jié)合DNA的離心吸附柱和*的緩沖液系統(tǒng),提取全血基因組DNA。離心吸附柱中采用的硅基質(zhì)材料為本公司*新型材料,能夠高效、專一吸附DNA,可大限度去除雜質(zhì)蛋白及細(xì)胞中其他有機(jī)化合物。提取的基因組DNA段大,純度高,質(zhì)量穩(wěn)定可靠。使用本試劑盒提取的基因組DNA可用于各種常規(guī)操作,包括酶切、 PCR、文庫構(gòu)建、Southern雜交等實(shí)驗(yàn)。
操作步驟:
使用前請先在漂洗液和溶液B中加入無水乙醇,加入體積請參照瓶體上的標(biāo)簽。所有離心步驟均為使用臺式離心機(jī)在室溫下離心。
1、樣品的處理(本產(chǎn)品適用于處理新鮮的或已經(jīng)添加抗凝劑的0.lml-1ml血液樣品):
a、在血液樣品中加入2-3倍體積的紅細(xì)胞裂解液,充分顛倒混勻,12000rpm離心1min,小心吸去上清,沉淀應(yīng)為白色或淡紅色,如果裂解不*,可重復(fù)以上述步驟一次。向沉淀中加200ul溶液A,振蕩*混勻。
b、如果處理的血樣為禽類、鳥類、兩棲類或更低級生物的血液,其紅細(xì)胞為有核細(xì)胞,因此處理量為5-20u1,不需要再用紅細(xì)胞裂解液處理,直接加200ul溶液A,振蕩*混勻。
2、向懸浮液中加入20ul (10mg/ml) 的RNase A,充分顛倒混勻,室溫放置10min。
3、加入20ul ( 10mg /ml ) 的蛋白酶K,充分顛倒混勻,65℃水浴消化30-60min,消化期間可顛倒離心管混勻數(shù)次,直樣品消化*為止。
4、加入2倍體積溶液B(使用前請先檢查是否己加入無水乙醇),充分顛倒混勻,此時(shí)可能會出現(xiàn)絮狀沉淀,不影響DNA的提取,可將溶液和絮狀沉淀都加入吸附柱中,室溫放置2min。
5、12000rpm離心2min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。
6、向吸附柱中加入700ul漂洗液(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇), 12000rpm離心1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。
7、向吸附柱中加入500ul漂洗液,12000rpm離心1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。
8、12000rpm離心2min,將吸附柱敞口置于室溫或50℃溫箱放置數(shù)分鐘,目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除,否則漂洗液中的乙醇會影響后續(xù)的實(shí)驗(yàn)如酶切、PCR等。
9、將吸附柱放入一個(gè)干凈的離心管中,向吸附膜中央懸空滴加50-200ul經(jīng)65℃水浴預(yù)熱的洗脫液,室溫放置5min,12000rpm離心1min。
10、離心所得洗脫液再加入吸附柱中,12000rpm離心2min,即可得到高質(zhì)量的基因組DNA。
注意事項(xiàng):
1、本試劑盒置于室溫( 15 -25℃) 干燥條件下可保存12個(gè)月,更長時(shí)間的保存可置于2 -8℃。
2、常用的血液抗凝劑有EDTA、ACD和肝素等,需注意的是,如欲制備大分子量血液基因組DNA,可優(yōu)先考慮使用ACD抗凝。一般不使用肝素抗凝,因?yàn)橛酶嗡乜鼓难禾崛〉幕蚪MDNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增時(shí),有PCR擴(kuò)增抑制現(xiàn)象。
3、樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融,否則會導(dǎo)致提取的DNA段較小且提取量也下降。
4、如果試劑盒中的溶液出現(xiàn)沉淀,可在65℃水浴中重新溶解后再使用,不影響效果。
5、絕大多數(shù)哺乳動(dòng)物的全血如入全血中的紅細(xì)胞無核,故在提取基因組DNA時(shí)需去除不含DNA的無核紅細(xì)胞,以免影響紅細(xì)胞裂解和DNA釋放。如果處理的血樣為禽類、鳥類、兩棲類或更低級生物的血液,其紅細(xì)胞為有核細(xì)胞,因此處理量減少為5-20ul,不需要再用紅細(xì)胞裂解液來裂解紅細(xì)胞。
6、洗脫緩沖液的體積不少于50ul,體積過小會影響回收效率:洗脫液的pH值對洗脫效率也有影響,若需要用水做洗脫液應(yīng)保證其pH值在8.0左右(可用NaOH將水的pH值調(diào)此范圍),pH 值低于7.0會降低洗脫效率。
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